免疫荧光 标记为什么不直接标记第一抗体标记 二抗？如果一抗有可检测的标记(如band 荧光，放射性，化学发光或生色基团)，那么二抗是不必要的。感谢您订购荧光 标记，荧光染料的所有颜色都可以接受，荧光染色的主要原理是利用抗原与抗体的特异性结合来展示目的蛋白，主要包括蛋白与一抗的结合，其次是荧光group二抗一抗的识别与结合，荧光显微镜下观察。
细胞膜蛋白免疫荧光染色问题1。问:用免疫荧光方法制作组织切片和在细胞内培养蛋白质有什么区别？参考:只是固定方式不同而已。细胞用甲醇固定，切片用多聚甲醛固定，但染色方法相同。2.问:近期要做免疫荧光的双标。不知道谁有免疫双标技术的详细步骤和注意事项荧光？参考:我在做免疫荧光冰冻组织切片双重染色。我的经验是:(1)选择一抗时，应该来自两种不同的动物。我用的是兔和鼠的抗体，和二抗不一样荧光signal标记。我使用donkeyantirabbitFITC(绿色)和/或。
应仔细研究抗体浓度和孵育时间。感觉4度过夜孵育一抗比较好，背景清晰。(3)我的阳性对照使用阳性组织切片，阴性对照为兔和大鼠IgG，荧光-2/物质对照为PBS 荧光-2/物质对照。(4)封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%正常驴血清。(5)其他步骤同普通免疫荧光单项标准操作。
single荧光-2荧光染料的所有颜色均可接受。是构建融合蛋白还是标记抗体？普通荧光显微镜观察还是共焦观察？如果要构建融合蛋白，可以附着GFP或RFP。抗体标记可自制或自行购买，二抗可标记FITC或罗丹敏，都有可能。至于激发和发射波长，一般荧光显微镜不是很严格，就是蓝色激发绿色，绿色激发红色，紫色激发黄色；
3、细胞免疫 荧光,求助Immunology荧光染色的主要原理是利用抗原与抗体的特异性结合来展示目的蛋白，主要包括蛋白与一抗的结合，其次是荧光group二抗一抗的识别与结合，-1。实验步骤如下:1 .将转染72小时的细胞种植在特殊的共聚焦培养皿中，并用冰PBS洗涤三次，每次5分钟。2.细胞半干时，用4%冷多聚甲醛覆盖固定15分钟，避光。3.吸收多聚甲醛后，用冰PBS洗三次，每次5分钟。
5.与二抗来自同一宿主的血清？进口的胎牛血清在室温下密封30分钟。6.制备一抗(SAB 50 ug，美国适马):SAB FBS1: 200。7.加入一抗覆盖细胞，用锡纸包裹4度避光过夜。第二天:8。取出细胞，将其温热至室温约1小时。9、冰1‰吐温洗两次，每次5分钟，在摇壶里。冰PBS洗一次，5分钟，在振荡器中。10.准备荧光-2二抗:ab 50598 goatanirabigg(h
