如何切冻切片？快速冷冻切片制造方法和经验所有实验步骤1。新鲜组织4%多聚甲醛固定24小时，230%蔗糖脱水48小时以上，325℃包埋(冷冻切片机内)4冷冻切片冷冻-免疫组化染色步骤:冷冻切片4~8μm，室温静置30分钟，4℃丙酮固定10分钟，PBS洗。
所有实验步骤1:新鲜组织在4%多聚甲醛中固定24小时，230%蔗糖脱水48小时以上，325℃包埋(freeze 切片机内)4 freeze切片freeze切片step freeze。用3%过氧化氢孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗，5分钟×2次。
(看我之前的帖子)你确定你被冻住了切片？冻住了切片不能热修！以下是我的步骤:1。-1/室温冷冻30分钟，然后在4℃丙酮中固定10分钟，在PBS中洗涤5分钟×3。用3%双氧水孵育5~10分钟，用PBS洗5分钟×2。25 ~ 10%正常山羊血清(用PBS稀释)密封，室温孵育10分钟。倒出血清，不要洗涤，按适当比例滴加稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。
1。样品处理1.1Q:包埋过程中应遵循哪些原则？答:(1)选择的组织要大小合适，便于后续实验操作。(2)取的组织应尽可能新鲜，避免RNA降解。(3)选择合适的包埋盒，包埋盒不能太小，以免包埋过程中包埋剂膨胀挤压组织。(4)包埋过程中避免包埋剂分层，防止组织表面形成小冰块，避免形成气泡，影响后续实验-1。1.2q:切片染色拍照后发现组织中间有空洞。发生了什么事？
1.3Q:什么是组织形态的收缩？答:针对这种情况，冷冻温度和时间的控制极其重要。冷冻温度不能太低，一般18℃为宜。冷冻时间要严格控制不要太长，随时可以冻结。这样可以有效避免组织过度收缩。1.4Q:组织形态严重变形是怎么回事？答:有可能是使用的包埋盒体积太小。包埋过程中，包埋剂膨胀挤压组织，导致组织严重变形。建议更换较大的嵌入盒重新嵌入。
3、怎么切好冰冻 切片?Freeze 切片技术1。从锋利的刀片开始，我发现当使用新的锋利刀片时，我经常可以拍出高质量的电影。我认为在医疗情况下尽可能省钱的一些方法似乎有点因小失大。一般来说，我对每个病人的标本都使用一套新的刀片。当胶片质量开始下降时，我会立即更换刀片。有些组织，如硬胶原蛋白、钙化组织等，会使刀片很快变钝，所以要经常更换刀片。有时候在切片的过程中要换23次刀片。
要学会操作刷子这种便捷的辅助工具，才能精细控制薄膜的微观厚度。切片弯腰伸脖子有问题。尽量保持放松舒适的姿势，以便最大程度地控制左手。3.刷机我是刷机用户。我相信，要想剪好片子，首先要学会用笔刷。刷子的作用是把膜粘住，拿到桌子上。冷冻的膜会自发翘起，从刷子上脱落，所以我用的是有刷毛的，夹面宽的刷子。
4、冰冻 切片机温度设置Freeze 切片机器温度设定，使用前2小时打开电源，温度设定为零下25℃。将大小和厚度合适的标本放入蘑菇状杯中，加入冷冻蜡，夹在切片机的固定槽中，准备载玻片，选择切片厚度，摇动手柄使切片，仔细将made 切片吸附在玻璃片上，用后关闭电源，清洁腔体并擦干水汽，做好使用记录。为了使水蒸气蒸发，请不要立即关闭切片 machine的上盖滑门，第二天再关闭。
