要实现这三个基本原则，需要考虑很多因素，比如引物长度、产物长度、解链温度、双链引物和模板的内部稳定性(我只想说，takeiteasy)。
②ccugagagagagagaga原因是先找到能转录成含脯氨酸密码子的DNA片段，然后逐一比对。结果②链中只有第三个碱基符合要求。这个问题的关键是要知道DNA转录后的所有链不一定都是从一端开始，有时也可以从中间开始。找到对应的链后，只需要根据碱基互补配对的原理转录出对应的密码子即可。在解决了第一个问题的基础上，第二个问题就不难了，因为只有在改变的氨基酸链中排名第三的谷氨酸变成了甘氨酸，所以谷氨酸的密码子对应的基因发生了突变，RNA链中的谷氨酸因为只有一个碱基发生了突变变成了GGG，对应的DNA链也从CTC变成了CCC，所以只需要把第一个问题中②的DNA链中对应位置的CTC改成CCC即可。
网上有很多PCR引物设计的规则，相信你都看过。放轻松。我当时用的PP5，并不是说他设计的引物分数低，你就拿不到。这些都不是绝对的。第一次设计的引物总是没有那么淡定。其实你可以请你的兄弟姐妹来教你，这样才不会耽误你自己的实验进度。也可以尝试设计一两对引物，尝试PCR。因为PCR毕竟没那么难，当然你这个问题我没看懂。如果真的要PCR产物2,000 bp以上，那就有点麻烦了。
最近我一个同学做PCR，产物也是2000bp。他刚刚解决了这个问题，因为Mg离子浓度的问题，优化PCR条件也很重要，其实一般来说，他们都是按照一个共同的制度来做这件事的。TaKaRa的缓冲液都是现成的，技术人员也是分离Mg离子的，其实我讲了很久，也没有回答你是怎么设计引物的。我只想说，takeiteasy，规章制度太多也没用。我同学只要用眼睛看就能设计出引物，有必要系统地打100分吗？当然，考虑到实验成本，尽力而为吧，好运。
